Experimental methods
분야별실험법
[Microbiology] 식품공전-대장균군(정성시험)
유당배지법
실험방법
1) 유당배지를 이용한 대장균군의 정성시험은 추정시험, 확정시험, 완전시험의 3단계로 나뉨
2) 시험용액 10ml를 2배 농도의 Lactose Broth 발효관에, 시험용액 1ml, 0.1ml를 Lactose Broth 발효관에 각각 3개 이상씩 분주
3) [추정1] 시험용액을 접종한 Lactose Broth를 인큐베이터에서 35～37℃ 24±2시간 배양
3) [추정2] 가스 발생유무 체크 - 가스가 발생하면 추정시험 양성, 만약 발생하지 않았을 때, 추가로 48±3시간까지 배양하여 가스가 발생하지 않으면 음성
4) [확정1] 추정시험에서 가스 발생한 샘플을 BGLB 배지에 접종하여 인큐베이터에서 35~37℃ 24±2시간 동안 배양
4) [확정2] 가스 발생유무 체크 - 가스가 발생하면 추정시험 양성, 만약 발생하지 않았을 때, 추가로 48±3시간까지 배양 (48시간 배양 후 배지의 색이 갈색으로 변했다면 반드시 완전시험 실시)
4) [확정3] 확정2에서 가스 발생한 샘플을 Endo Agar 또는 EMB Agar에 접종하여 인큐베이터에서 35~37℃ 24±2시간 배양
4) [확정4] 전형적인 집락이 발생되면 확정시험 양성
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Endo Agar |
EMB Agar |
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Escherichia coli |
분홍에서 진한 적색, 녹색 금속광택 |
크고, 청-흑색, 녹색 금속광택 |
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Enterobacter/Klebsiella |
대형, 점성, 분홍 |
크고, 점성, 청-흑색 |
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Proteus |
무색에서 연한 분홍 |
크고, 무색 |
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Salmonella |
무색에서 연한 분홍 |
크고, 무색 |
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Shigella |
무색에서 연한 분홍 |
크고, 무색 |
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Pseudomonas |
불규칙, 무색 |
불규칙, 무색 |
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Gram-positive bacteria |
비생장에서 약간 생장 |
비생장에서 약간 생장 |
5) [완전1] 확정시험에서 전형/비전형 집락이 발생한 샘플의 집락을 채취 (전형적 집락 1개 or 비전형적 집락 2개)
5) [완전2] Nutrient Agar에 접종하여 인큐베이터에서 35∼37℃ 24±2시간 동안 배양
5) [완전3] Nutrient Agar의 집락에 대하여 Gram Stain Kit를 이용하여 염색을 진행, 그람음성, 무아포성 간균이 증명되면 완전시험은 양성이며 대장균군 양성으로 판정
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