Experimental methods
분야별실험법
[Microbiology] 식품공전-대장균군(정성시험)
Desoxycholate Lactose Agar법
실험방법
1) 시험용액 1ml와 10배 단계희석액 1ml을 Petri Dish 2장 이상에 분주
2) 항온수조를 이용하여 43～45℃로 유지한 Desoxycholate Lactose Agar or VRBA 약 15 mL를 1단계에서 준비한 Petri Dish에 분주
3) 검체와 배지가 잘 혼합되도록 좌우로 기울이면서 응고시켜줌
4) 확산집락 발생을 억제하기 위하여 동일한 배지 3-5ml를 중첩 분주
5) 응고 후 인큐베이터에서 35~37℃ 24±2시간 배양 후
6) 전형적인 암적색의 집락이 확인되었을 때는 1개 이상의 집락을, 의심스러운 집락일 경우 2개 이상의 집락을 채취
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Desoxycholate Lactose Agar 집락 |
Violet Red Bile Agar 집락 |
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7) [확정1] 채취한 집락을 Endo Agar 또는 EMB Agar 또는 MacConkey Agar에 접종하여 인큐베이터에서 35~37℃ 24±2시간 배양
7) [확정2] 전형적인 집락이 발생되면 확정시험 양성
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Endo Agar |
EMB Agar |
MacConkey Agar |
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Escherichia coli |
분홍에서 진한 적색, 녹색 금속광택 |
크고, 청-흑색, 녹색 금속광택 |
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Enterobacter/Klebsiella |
대형, 점성, 분홍 |
크고, 점성, 청-흑색 |
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Proteus |
무색에서 연한 분홍 |
크고, 무색 |
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Salmonella |
무색에서 연한 분홍 |
크고, 무색 |
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Shigella |
무색에서 연한 분홍 |
크고, 무색 |
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Pseudomonas |
불규칙, 무색 |
불규칙, 무색 |
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Gram-positive bacteria |
비생장에서 약간 생장 |
비생장에서 약간 생장 |
8) [완전1] 확정시험에서 전형/비전형 집락이 발생한 샘플의 집락을 채취 (전형적 집락 1개 or 비전형적 집락 2개)
8) [완전2] Nutrient Agar에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 동안 배양
8) [완전3] Nutrient Agar의 집락에 대하여 Gram Stain Kit를 이용하여 염색을 진행, 그람음성, 무아포성 간균이 증명되면 완전시험은 양성이며 대장균군 양성으로 판정
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