분야별실험법
[Microbiology] 식품공전-대장균(정량시험)
실험방법
1) [제1법] 10배씩 연속 3단계 희석한 시료액(10, 1, 0.1 또는 1, 0.1, 0.01 또는 0.1, 0.01, 0.001)을 3~5개씩 준비하여, EC Broth 발효관에 접종 후 44.±1℃에서 24±2시간 배양
* 단, 10 mL를 접종할 때에는 두배 농도 EC Broth를 사용하고 0.1 mL 이하를 접종할 필요가 있을 때에는 10배 희석 단계액을 각각 1 mL씩 사용
1) [제1법] 가스 발생유무 체크 - 가스가 발생하면 양성으로 판정하고 최확수표에 따라 검체 1 mL 또는 1 g중의 대장균수를 구함
2) [제2법]-시험용액의 제조 : 패각을 제거한 검체 200g에 0.1% peptone solution 200mL을 첨가하여 마쇄(분쇄)
2) [제2법]-시험용액의 제조 : 마쇄액 20 mL과 동일한 희석액 80 mL을 혼합하여 최종 10배 희석한 것을 시험용액으로 사용 (시험용액은 필요에 따라 100배, 1,000배 등으로 희석하여 사용 가능)
3) [제2법]-추정시험 : 시험용액 10ml을 5개의 2배농도 MMGM Broth가 들어있는 시험관에 접종 후 인큐베이터에서 37±1℃ 24±2시간 배양
3) [제2법]-추정시험 : 시험관 내 배지의 색이 노란색으로 되었을 때, 추정시험 양성으로 하며 확정시험을 실시
4) [제2법]-확정시험 : 추정시험에서 양성 판정된 MMGM Broth 시험관 배양액을 BCIG Agar 배지에 접종하여 인큐베이터에서 44±1℃ 24±2시간 동안 배양 후 청녹색(Blue-green)의 전형적인 집락이 발생하면 양성으로 판정하고 최확수표에 따라 검체 100g중 대장균수를 구함