분야별실험법
[Microbiology] 식품공전-유산균수
실험방법
1) 증균배양
식품 및 식육 |
1. 시료 25 mL(g)에 225 mL의 Buffered Peptone Water를 첨가하여 36±1℃에서 18~24시간 배양 2. 이 배양액을 2종류의 증균배지, 즉 10 mL의 Tetrathionate 배지(Tetrathionate Broth Base + Iodine-potassium iodide (I-KI) solution+Brilliant Green Solution)에 1 mL를 첨가함과 동시에 10 mL의 RV R10 Broth 또는 RVS Peptone Broth에 0.1 mL를 첨가하여 각각 36±1℃(Tetrathionate 배지) 및 41.5±1℃(RV 배지 또는 RVS 배지)에서 20~24시간 동안 증균배양 |
소, 돼지도체 |
1. 멸균가아제나 스폰지로 시료를 채취한 후 멸균백에 넣고 50 mL Buffered Peptone Water를 넣은 다음 균질화 시킨 후 36±1℃에서 18~24시간 배양 2. 이 배양액을 2종류의 증균배지, 즉 10 mL의 Tetrathionate 배지(Tetrathionate Broth Base + Iodine-potassium iodide (I-KI) solution+Brilliant Green Solution)에 1 mL를 첨가함과 동시에 10 mL의 RV R10 Broth 또는 RVS Peptone Broth에 0.1 mL를 첨가하여 각각 36±1℃(Tetrathionate 배지) 및 41.5±1℃(RV 배지 또는 RVS 배지)에서 20~24시간 동안 증균배양 |
닭, 오리도체 |
1. 채취한 시료 30 mL을 취하여 30 mL Buffered Peptone Water에 넣은 다음 균질화 시키고 36±1℃에서 18~24시간 배양 2. 이 배양액을 2종류의 증균배지, 즉 10 mL의 Tetrathionate 배지(Tetrathionate Broth Base + Iodine-potassium iodide (I-KI) solution+Brilliant Green Solution)에 1 mL를 첨가함과 동시에 10 mL의 RV R10 Broth 또는 RVS Peptone Broth에 0.1 mL를 첨가하여 각각 36±1℃(Tetrathionate 배지) 및 41.5±1℃(RV 배지 또는 RVS 배지)에서 20~24시간 동안 증균배양 |
식용란 |
1. 식용란 20개를 채취하여 소독 한 후 말린 식용란을 깨서 4L 용량의 멸균비이커 또는 멸균비닐백 등 적정한 용량의 멸균용기에 넣어서 준비 2. 멸균 도구 등을 이용하여 난황과 난백이 섞이도록 균질화를 시킨 후, 준비된 시료에 2L의 멸균 Tryptic Soy Broth를 섞어 35℃에서 24±2시간 동안 증균 3. 이 배양액을 2종류의 증균배지, 즉 10 mL의 Tetrathionate 배지(Tetrathionate Broth Base + Iodine-potassium iodide (I-KI) solution+Brilliant Green Solution)에 1 mL를 첨가함과 동시에 10 mL의 RV R10 Broth 또는 RVS Peptone Broth에 0.1 mL를 첨가하여 각각 36±1℃(Tetrathionate 배지) 및 41.5±1℃(RV 배지 또는 RVS 배지)에서 20~24시간 동안 증균배양 |
2) 분리배양 - 각각의 증균배양액을 XLD Agar 및 BG Sulfa Agar 또는 Bismuth Sulfite Agar, Desoxycholate Citrate Agar, Hektoen Enteric Agar, XLT4 Agar & Supplement 중 도말한 후 36±1℃에서 20~24시간 배양. 의심집락은 5개 이상 취하여 확인시험을 실시
XLD Agar |
BG Sulfa Agar |
Bismuth Sulfite Agar |
Desoxycholate Citrate Agar |
Hektoen Enteric Agar |
XLT4 Agar & Supplement |
3) 확인시험
- 생화학적 확인시험 : 의심스러운 집락에 대해 Triple Sugar Iron Agar 또는 Lysine Iron Agar 시험관에 접종하여 37±1℃에서 20~24시간 배양. TSI 및 LIA 검사결과 살모넬라균으로 추정되는 균에 대해서는 그람음성의 간균임을 확인하고, Indol(-), MR(+), VP(-), Citrate(+), Urease(-), Lysine(+), KCN(-), malonate(-) 시험등의 생화학적 검사를 실시하여 살모넬라 양성유무를 판정
Triple Sugar Iron Agar |
Lysine Iron Agar |
(Difco & BBL Manual 참조-BD Korea 협조)
- 응집시험 : 균종 확인이 필요한 경우 살모넬라진단용 항혈청을 사용한 응집반응 결과에 따라 균종을 결정
[O혼합혈청 시험] 살모넬라 O혼합혈청 시험으로서 다가 O항혈청을 사용하여 슬라이드 응집반응검사를 실시
[O혼합혈청 시험] 살모넬라 O인자 혈청시험 즉 A, B, C, D, E군 등의 인자 항혈청으로 슬라이드 응집반응을 실시하여 O혈청형을 결정
[H인자 혈청시험] H인자 혈청시험은 편모(H)항혈청 즉 a, b, c, d, e, h, g, k, l , r, y, 1.2, 1.3, 1.5, 1.6 등에 대해 시험관 응집반응을 실시하여 결정