분야별실험법
[Microbiology] 식품공전-황색포도상구균
실험방법
1) 균수 측정 - 검체 25 g 또는 25 mL를 취한 후, 225 mL의 희석액을 가하여 스토마커에 2분간 고속으로 균질화한 것을 시험용액으로 하여 10배 단계 희석액 제조
2) 균수 측정 - 단계 별 희석액을 Baird Parker Agar Petri Dish 3장에 0.3 mL, 0.4 mL, 0.3 mL씩 총 접종액이 1 mL이 되게 도말
* 사용되는 배지는 완전히 건조시켜 사용하고 접종액이 배지에 완전히 흡수되도록 도말한 후 10분간 실내에서 방치
3) 균수 측정 - 35~37℃ 에서 48±3시간 배양한 다음 투명한 띠로 둘러싸인 광택의 검정색 집락을 계수
[실험결과]
(Difco & BBL Manual 참조-BD Korea 협조)
4) 확인 시험 - 계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별 후 Nutrient Agar에 접종하여 35~37℃에서 18~24시간 배양한 후 Gram Stain Kit를 이용하여 그람염색을 진행하여 포도상의 배열을 갖는 그람양성 구균을 확인
5) 확인 시험 - Coagulase 시험을 실시하며 24시간 이내에 응고유무를 판정하고 양성으로 확인된 것은 생화학 실험을 실시하여 판정
6) 균수 계산 - 확인 동정된 균수에 희석배수를 곱하여 계산
예를 들어 10-1 희석용액을 0.3 mL, 0.3 mL, 0.4 mL씩 3장의 선택배지에 도말 배양하고, 3장의 집락을 합한 결과 100개의 전형적인 집락이 계수되었고 5개의 집락을 확인한 결과 3개의 집락이 황색포도상 구균으로 확인되었을 경우 시험용액 1 mL에는 황색포도상 구균의 수는 10 × 100 × (3/5) = 600으로 계산