분야별실험법
[Microbiology] 식품공전-장염비브리오
실험방법
1) 균수측정 - 검체 25 g 또는 25 mL를 채취 후, 225 mL의 희석액을 가하여 2분간 고속으로 균질화하여 시험용액을 준비 후 10배 단계 희석액을 만듬
2) 균수측정 - 각 단계별 희석액을 TCBS Agar 3장에 0.3 mL, 0.4 mL, 0.3 mL씩 총 접종액이 1 mL이 되게 도말. 사용된 배지는 완전히 건조시켜 사용하고 접종액이 배지에 완전히 흡수되도록 도말한 후 10분간 실내에서 방치시킨 후 35~37℃ 에서 18~24시간 배양한 다음 청록색의 sucrose 비분해 집락을 계수
3) 확인시험 - 계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 2% NaCl을 첨가한 Nutrient Agar에 접종하고 35~37℃에서 18~24시간 배양
4) 확인시험 - 분리배양된 평판배지상의 집락을 Triple Sugar Iron Agar, Lysine Indole Motility Medium, 2% NaCl을 첨가한 Nutrient Agar에 각각 접종한 후 35~37℃에서 18~24시간 배양 (장염비브리오는 Triple Sugar Iron Agar에서 사면부가 적색, 고층부는 황색, 가스가 생성되지 않으며 LIM배지에서 Lysine Decarboxylase 양성, Indole 생성, 운동성 양성, Oxidase시험 양성)
(Difco & BBL Manual 참조-BD Korea 협조)
5) 확인시험 - 장염비브리오로 추정된 균은 0, 3, 8 및 10% NaCl을 가한 Alkaline Peptone Water에 의한 내염성시험 실시, MR-VP Medium 배지를 이용한 VP 시험 실시, Mannitol 이용성시험(Purple Broth Base + 1% Mannitol), Arginine 및 Ornithine 분해시험(Moeller Basal Broth + 1% Arginine 또는 1% Ornithine), ONPG(O-nitrophenyl-β-D-galacto-pyranoside Broth)시험을 실시
6) 균수 계산 - 확인 동정된 균수에 희석배수를 곱하여 계산