실험방법

1) 증균배양 - 제조법(시료25g/희석액1ml)에 따른 시험용액 1 mL를 Cooked Meat Medium의 아랫부분에 접종하여 35~37℃에서 18～24시간 동안 혐기배양

2) 분리배양 - 증균배양액을 다음 배지들 중 하나에 접종하여 35∼37℃에서 18～24시간 혐기배양. 의심 집락은 확인시험을 실시

* Kanamycin을 200 μg/mL의 농도로 가한 난황 첨가 Clostridium Perfringens Agar

* Kanamycin을 200 μg/mL의 농도로 가한 난황 첨가 Perfringens Agar Base

3) 확인시험 - 분리배양된 평판배지상의 집락을 2장의 Nutrient Agar에 옮겨, 1장은 35∼37℃에서 18～24시간 혐기배양한 후 그람염색을 실시. 또 다른 1장은 Nutrient Agar를 35∼37℃에서 18～24시간 호기 배양하여 균의 비발육을 확인

4) 확인시험 - 그람양성간균으로 확인된 집락은 glucose, lactose, inositol, raffinose를 1% 가한 4종의 GAM 배지에 옮겨 35∼37℃에서 3일간 배양 후 BTB-MR Solution을 가해서 붉은 색으로 변하는 것을 양성으로 판정

5) 확인시험 - 운동성은 GAM 배지에서 35∼37℃에서 1～2일간 배양하여 유무를 관찰

6) 확인시험 - Glucose, lactose, inositol과 raffinose를 분해하며 운동성이 없는 것을 확인하면 Lecithinase 억제시험을 실시

7) 확인시험 - 난황 첨가 Perfringens Agar Base에 접종하여 35∼37℃에서 24시간 혐기배양한 후 2～4 mm의 불투명한 환을 가지는 황회색 집락을 양성으로 판정