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Experimental methods

분야별실험법

[Cell Culture] 초대배양

Primary Culture

 


실험방법

    

1) 준비된 조직 및 샘플에 Forcep을 이용하여 필요한 세포가 위치한 부위를 절취

2) PBS로 세척 후 잘게 썰어 homogenizer로 분쇄

3) 분쇄된 샘플을 Conical Centrifuge에 옮겨 원심분리(350g, 5)하여 상층액을 제거

4) 샘플을 Conical Centrifuge Tube에 옮겨 세포에 알맞은 Enzyme(ex.cdd, collagenase)을 첨가하여 Parafilm으로 막고 37에서 Incubation

5) Trypan Blue Solution과 현미경을 이용하여 Single Cell이 분리되었는지 체크

6) 세포에 알맞은 Media를 첨가 후 Cell Strainer로 여과

7) 원심분리 후 상층액을 제거 후 Purification(ex.percoll, ficoll)

8) 새로운 Media에 현탁하여 세포 수 계측 후 Multi Well Cell Culture Plate로 옮겨 CO2 인큐베이터에 배양

 

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