분야별실험법
[Cell Culture] 초대배양
실험방법
1) 준비된 조직 및 샘플에 Forcep을 이용하여 필요한 세포가 위치한 부위를 절취
2) PBS로 세척 후 잘게 썰어 homogenizer로 분쇄
3) 분쇄된 샘플을 Conical Centrifuge에 옮겨 원심분리(350g, 5분)하여 상층액을 제거
4) 샘플을 Conical Centrifuge Tube에 옮겨 세포에 알맞은 Enzyme(ex.cdd, collagenase)을 첨가하여 Parafilm으로 막고 37℃에서 Incubation
5) Trypan Blue Solution과 현미경을 이용하여 Single Cell이 분리되었는지 체크
6) 세포에 알맞은 Media를 첨가 후 Cell Strainer로 여과
7) 원심분리 후 상층액을 제거 후 Purification(ex.percoll, ficoll)
8) 새로운 Media에 현탁하여 세포 수 계측 후 Multi Well Cell Culture Plate로 옮겨 CO2 인큐베이터에 배양