분야별실험법
[Protein] Blocking
실험방법
1 ) Transfer가 끝난 Membrane을 분리하여 Ponceau 용액에 넣고 Staining 후 뺌
2) 염색된 Band 가 잘 보일 때까지 흐르는 물에 Washing
3) 5% Skim milk in TBST buffer (교반기를 이용하여 Skim milk를 완전히 풀어줘야함) 에 Membrane을 넣고 Rocker를 이용하여 Blocking
4) 기존 Skim milk를 버리고 새 Skim milk를 Membrane이 잠길 정도로 넣고 Primary Antibody를 넣어 Rocking (4°C, Overnight)
5) 1X TBST에 10-15분 간격으로 3번 Washing (Washing 시마다 새 시약으로)
6) 5% Skim milk에 희석된 Secondary Antibody [horse radish peroxidase(HRP)가 결합된] 를 Rocker를 이용하여 Blocking (상온, 1hr)
7) 1X TBST에 10-15분 간격으로 3번 Washing (Washing 시마다 새 시약으로)