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Experimental methods

분야별실험법

[Protein] Blocking

Blocking

  

실험방법

 

) Transfer가 끝난 Membrane을 분리하여 Ponceau 용액에 넣고 Staining 후 뺌

2) 염색된 Band 가 잘 보일 때까지 흐르는 물에 Washing

3) 5% Skim milk in TBST buffer (교반기를 이용하여 Skim milk를 완전히 풀어줘야함) Membrane을 넣고 Rocker를 이용하여 Blocking

4) 기존 Skim milk를 버리고 새 Skim milkMembrane이 잠길 정도로 넣고 Primary Antibody를 넣어 Rocking (4°C, Overnight)

5) 1X TBST10-15분 간격으로 3Washing (Washing 시마다 새 시약으로)

6) 5% Skim milk에 희석된 Secondary Antibody [horse radish peroxidase(HRP)가 결합된] Rocker를 이용하여 Blocking (상온, 1hr)

7) 1X TBST10-15분 간격으로 3Washing (Washing 시마다 새 시약으로)

 

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