Experimental methods
분야별실험법
[Microbiology] 식품공전-바실러스 세레우스
정성시험
실험방법
1) 분리배양 - 검체 25 g 또는 25 mL를 채취 후, 225 mL의 희석액을 가하여 1~2분간 저속으로 균질화하여 시험용액을 준비 후 MYP Agar에 접종하여 30℃, 24시간 배양하거나 Polymyxin pyruvate egg yolk mannitol bromothymol blue Agar에 접종하여 37℃에서 24시간 배양
2) 분리배양 - 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험군으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인 후 확하지 않을 경우 24시간 더 배양하여 관찰
| MYP Agar | Polymyxin pyruvateegg yolk mannitol bromothymol blue Agar |
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혼탁한 환을 갖는 청녹색 집락을 선별 |
3) 확인시험 - 각 배지에서 전형적인 집락을 선별하여 Nutrient Agar 접종하고 30℃에서 24시간 배양
4) 확인시험 - 배양 후 그람염색을 실시하여 포자를 갖는 그람양성 간균을 확인하고, 확인된 균은 nitrate 환원능, VP, β-hemolysis, tyrosine 분해능, 혐기배양시의 포도당 이용 등의 생화학시험을 실시하며, 추가로 30℃, 24시간 그리고 상온, 2∼3일 추가 배양하여 곤충독소단백질(Insecticidal crystal protein) 생성 확인시험주)도 실시
* 이 시험법은 Bacillus cereus와 Bacillus thuringiensis를 구분하는 시험법으로, Nutrient Agar에 30℃, 24시간 그리고 상온, 2∼3일 추가 배양한 후 직접 또는 염색하여 현미경 관찰결과(×1000배), 곤충독소단백질이 확인되면 Bacillus thuringiensis로 함
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