분야별실험법
식품공전-바실러스 세레우스
실험방법
1) 분리배양 - 검체 25 g 또는 25 mL를 채취 후, 225 mL의 희석액을 가하여 2분간 고속으로 균질화하여 시험용액을 준비 후 10배 단계 별 희석액을 만듬
2) 분리배양 - MYP Agar에 단계별 희석용액 총 접종액이 1 mL이 되도록 3∼5장을 도말하여 30℃에서 24±2시간 배양한 후 집락 주변에 Lecithinase를 생성하는 혼탁한 환이 있는 분홍색 집락을 계수하며 검체를 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인
3) 확인시험 - 계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 Nutrient Agar에 접종하여 30℃에서 18~24 배양 후 그람염색을 실시하여 포자를 갖는 그람양성 간균을 확인하고, 확인된 균은 nitrate 환원능, VP, β-hemolysis, tyrosine 분해능, 혐기배양시의 포도당 이용 등의 생화학시험을 실시하며, 추가로 30℃, 24시간 그리고 상온, 2∼3일 추가 배양하여 곤충독소단백질(Insecticidal crystal protein) 생성 확인시험주)도 실시
4) 균수계산 - 확인 동정된 균수에 희석배수를 곱하여 계산한다. 예로 10-1 희석용액을 0.2 mL씩 5장 도말 배양하여 5장의 집락을 합한 결과 100개의 전형적인 집락이 계수되었고 5개의 집락을 확인한 결과 3개의 집락이 바실루스 세레우스로 확인되었을 경우 100×(3/5)×10= 600으로 계산